Lana Parrilla est née d'une mère italienne artiste-peintre Dolorès Dee Azzara et d'un père porto-ricain, Sam Parrilla. Ce dernier fut un joueur professionnel de baseball américain évoluant dans l'équipe des Phillies de Philadelphie dans les années 1970. Il est assassiné en 1994 à la suite d'une altercation qui a mal tourné. Elle a une sœur aînée prénommée Deena et est la nièce de l'actrice Candice Azzara, qui l'a inspirée dans sa carrière d'actrice.
Après le lycée, Lana Parrilla a déménagé à Los Angeles pour commencer sa carrière où elle a étudié à la Beverly Hills Playhouse. Lana Parrilla s'est fiancée à Alfredo Di Blasio, directeur de marketing le 28 avril 2013 lors d'une visite en Israël. Ils se sont mariés le 5 juillet 2014 en Colombie-Britannique. Ils se fréquentaient depuis 2011. Divorce prononcé le 5 novembre 2018. Elle réside actuellement à Los Angeles.
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